L15培养基是一种无二氧化碳细胞培养系统,不含碳酸氢钠。该培养基主要通过一些其他的添加物来维持细胞培养的pH范围,如使用半乳糖代替常用的葡萄糖。L-15培养基可用于多种细胞系培养,如HEp-2, L929, MRC-5和LLC-MK2。同时也适用于一些原代扩增,如胚胎组织和成体组织的培养。
L-15培养基的颜色比较浅,而且加入血清后放置一段时间颜色会变得更浅,所以在培养细胞时,会让人觉得特别容易变黄,不过一般来讲,正常培养情况下,会变得接近于橙色。
1)BME细胞培养基
基础Eagle培养基,BSS+12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素。简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究用。
2)MEM细胞培养基
又称低限量Eagle培养基,在Eagle's基础培养基(BME)上修改而来,删去赖氨酸、生物素,氨基酸浓度增加,适合多种细胞单层生长,有可高压灭菌品种,是一种最基本、试用范围最广的培养基。
3)DMEM细胞培养基
分为低糖和高糖两种。低糖适用于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养,也适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。
4)IMDM细胞培养基
用于培养红细胞和巨噬细胞前体。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞,LPS刺激的B细胞,骨髓造血细胞,T细胞和淋巴瘤细胞的生长。
5)RPMI-1640细胞培养基
针对淋巴细胞培养设计,含BSS+21种氨基酸+维生素11种等。现也用于悬浮细胞培养,如哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养。
6)HamF10细胞培养基
1963年Ham设计,含微量元素,可在血清含量低时用,适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞,特适于羊水细胞培养。
7)DMEM/F12细胞培养基
Ham's F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。
8)M199细胞培养基
M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。现广泛用于病毒学、疫苗生产。
9)McCoy5A培养基
MeCoy为肉瘤细胞设计,现可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长。
10)L15 细胞培养基
L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。
如何选择培养基
(1) 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。也可以在一些生物公司的网站上搜索,如Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具,选择你感兴趣的细胞类型,它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等,有时还有优化好的转染步骤,很方便。
(2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。
(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选RPMI1640 。
(4) 用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。
细胞培养基的主要成分及作用
1、能量来源
每一个生长培养基都需要碳源,以供细胞新陈代谢。碳源通常是葡萄糖,但也可以是其他糖类,如半乳糖、己糖、果糖或其他碳源(如丙酮酸,谷氨酰胺)。葡萄糖通常以终浓度为5.5 mM的含量添加,大约等于人体血液中的葡萄糖水平。然而,你可以购买葡萄糖浓度变化范围很广的培养基来满足你的具体需求。你甚至可以购买不含葡萄糖的培养基,然后自己定制浓度,模拟高糖的糖尿病状况,或者研究低糖应激反应。
2、缓冲液
细胞需要一种特殊的pH值从7.2到7.4,否则它们无法最好地发挥细胞功能,以供生长和存活。在二氧化碳含量较高的培养器中,二氧化碳与水发生反应,产生氢离子,使培养基酸化。为了中和二氧化碳产生的酸度,并在培养基中保持最佳pH值,大多数培养基都使用化学缓冲系统。然而,一些缓冲方法会干扰细胞生长。
哺乳动物细胞最常见的缓冲系统是碳酸氢钠,生物影响最小。碳酸氢钠与氢离子反应生成二氧化碳,隔离它们以保持pH值。然而,碳酸氢钠的一个缺点是,它在生理pH值上不是最佳的缓冲效果。为了避免这个问题,研究人员经常使用替代品,如HEPES,增加某些培养基类型的缓冲能力。
3、酚红
由于维持pH值对细胞培养至关重要,许多培养基配方包括一种名为酚红的pH指示剂,其在酸性条件下变黄(< 6.8),在基本条件下呈粉红色(> 8.2)。虽然通常不是问题,但酚红可以模拟雌激素,因此,当培养表达雌激素受体的细胞类型时,通常被排除在外。没有酚红的培养基可以用于比色测定,如MTT细胞增殖实验,苯酚的色谱可能会干扰光谱光度测量的读数,从而使结果混淆。
4、血清
对许多培养体系来说,一个重要组成部分是血清,通常是胎牛血清,称为FBS。血清来自于血液,是糖、盐、脂类、生长因子等许多成分的混合物。由于它的生物来源,很难维持再生性,因为每一批血清都是独一无二的。为了规避这一问题,一些实验室使用化学定义的血清替换物,一些实验室则购买一整批次的特定的血清,以确保一致的结果。
5、代谢物,维生素和矿物质
DMEM的成分列表主要分为三大类:氨基酸、维生素/辅因子和无机盐(包括钙和镁)。许多这些成分在所有细胞培养基中都是常见的,而精确的组合和浓度已经对细胞生长进行了优化。尽管如此,许多实验室还是选择用额外的非必需氨基酸补充他们的培养基,以防止细胞使用葡萄糖或谷氨酰胺来合成。此外,一些公司生产无镁和钙的培养基用于特定的研究,选择时请仔细查看。
6、抗生素
很多实验室都在他们的细胞培养中加入抗生素,以防止不需要的细菌或真菌的生长,即使是无菌工作。最常用的抗菌补充剂是青霉素和链霉素(pen / strep)的组合,在完整细胞培养基中,终浓度为青霉素50-100 IU/ mL和链霉素50 -100 g/ mL。然而,一些实验室选择不使用抗生素,因为抗生素会对细胞产生不必要的影响,或者可以掩盖低水平的细菌污染。根据需要,你可以决定是否在培养基中使用抗生素。
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