MRS肉汤培养基(Lactobacilli MRS Broth),是弱选择性培养基,支持乳酸菌的旺盛生长。
MRS肉汤培养基根据DeMan、Rogosa和Sharpe法用于各种材料中乳酸菌菌种的增菌、培养和分离。
乳酸菌MRS肉汤和MRS琼脂培养基(MRS固体培养基)也能用于乳杆菌鉴定中的检测实验。
蛋白胨提供氮源。牛肉浸粉和酵母提取物作为维生素来源。葡萄糖是可发酵的碳水化合物。培养基的微酸性环境,有利于乳酸杆菌的生长。乙酸钠和柠檬酸铵是选择剂,同时也是能量物质。乙酸钠对革兰氏阴性细菌和霉菌有抑制作用,但对乳酸杆菌无影响。硫酸镁和硫酸锰提供代谢必需的离子。司班80或吐温80是非离子型表面活性剂,辅助乳杆菌对营养物质的利用。
MRS培养基配方(成分g/L)
蛋白胨 10.0;牛肉提取物 10.0;酵母提取物 5.0;葡萄糖 20.0
柠檬酸三铵 2.0;乙酸钠 5.0;MgSO4 0.1;MnSO4 0.05;K2HPO4 2.0
吐温80 1.0。
MRS培养基配制方法
⑴称取55g本产品,加入1000ml纯水重悬。
⑵调节pH。
⑶121°C灭菌15min。
MRS培养基的应用
1、利用MRS琼脂平板梯度稀释法自15d龄、未使用过任何抗生素药物的仔猪粪便中筛选得到13株乳酸杆菌疑似菌株,通过生理生化鉴定,初步确定其中9为乳酸杆菌。经碳水化合物发酵试验,推测编号La-5,La-6,La-8和La-9的4株菌为嗜酸乳杆菌。比较4株菌的形态,长势及产酸能力,选定菌株La-5作为本研究的出发菌株。通过对菌株La-5的16 SrDNA同源性分析,结合其生理生化试验结果确定菌株La-5为嗜酸乳杆菌(Lactobaclllus acidophilus)。
2、以嗜酸乳杆菌La-5为出发菌株,采用梯度传代驯化法,对其耐酸、耐胆盐、耐热性能进行驯化,得到一株对低pH、高胆盐、高温具有良好强耐受性的优良菌株La-5c。对菌株La-5c的产酸性能研究表明,经发酵48h后的MRS培养液的总酸含量为12.88g/L,较空白培养液提高了大约4.8倍。说明嗜酸乳杆菌La-5c具有良好的产酸性能,适合制成菌剂应用于动物饲料添加剂。
3、用嗜酸乳杆菌La-5c喂养小白鼠,进行安全性及益生效果评价,结果表明菌株La-5c安全、无毒副作用,可明显增加小白鼠的体重,降低饲料的使用量,促进小白鼠对营养物质的吸收转化,明显改善小白鼠的免疫器官的生长发育。说明嗜酸乳杆菌La-5c具有很好的益生效果。
mrs培养基注意事项
1、样品的稀释,遵循常规用量,即25.0g/mL样品加入225g/mL生理盐水中进行稀释。但是对于冷冻样品,在稀释之前首先要进行解冻,对于解冻方式,标准作了明确规定:2-5℃条件下解冻,应少于18h或低于45℃条件下15分钟内解冻完毕,然后进行下一步操作。
2、在进行生化反应的过程中需要注意:
(1)接菌:必须为培养基平板纯培养出的新鲜培养物;
(2)覆盖石蜡:标准中规定,对于厌氧菌要加入液体石蜡后进行培养,但实际试验表明,不管对于兼性厌氧菌还是严格厌氧菌,加不加石蜡结果均一致,这个并不影响结果的判断,操作时尽量按照标准要求即可。
(3)培养时间:通常18h即可观察结果,现象不明显者可适当延长至24h。
(4)标准比对:对于有些生化反应,虽然标准中列出呈阳性或阴性反应,但实际试验时并不能一定得到这种结果,也就是不能与标准达到100%的符合,这并不是生化管产品的问题,可能是菌株差异所致,因为标准中所描述的阳性和阴性反应,都是以90%以上的菌株为范围的,并不是绝对所有的菌株都能达到这种反应。对于偶尔出现的这种现象,要理性对待,可以视情况选择其他的鉴定方法,对鉴定结论相互印证。
培养基的种类有哪些
1、RPMI-1640 Medium
RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum EssentialMedium(MEM)
也称最低必需培养基,它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单,可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型,而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12
DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂,含有多种微量元素,和DMEM以1:1结合,称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium),作为开发无血清配方的基础,以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在DMEM/F12(1:1)中加入15mMHEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5A
McCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。
7、Iscove’s ModifiedDulbecco Medium (IMDM)
Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为 Iscove’s Medium,用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞,LPS刺激的B细胞,骨髓造血细胞,T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液,因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
8、M-199 Medium
1950年,Morgan成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液,即M-199,主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。
9、Leibovitz Medium (L-15)
L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。
10、Ham’s F-10培养基:适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。
11、Ham’s F-12培养基:可以在加入很少血清的情况下应用,特别适合单细胞培养和克隆化培养,是无血清培养中常用的基础培养液。
12、William’s Medium E:用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。
13、MCDB 131 培养液:用于培养内皮细胞。
14、植物血凝素(PHA):增加细胞转化和DNA合成。
培养基常见类型
1.基础培养基
基础培养基(basic medium)含有多数细菌生长繁殖所需的基本营养成分。它是配制特殊培养基的基础,也可作为一般培养基用。如营养肉汤(nutrient broth)、营养琼脂(nutrient agar)、蛋白胨水等。
2.增菌培养基
若了解某种细菌的特殊营养要求,可配制出适合这种细菌而不适合其他细菌生长的增菌培养基(enrichment medium)在这种培养基上生长的是营养要求相同的细菌群。它包括通用增菌培养基和专用增菌培养基,前者为基础培养基中添加合适的生长因子或微量元素等,以促使某些特殊细菌生长繁殖,例如链球菌、肺炎链球菌需在含血液或血清的培养基中生长;后者又称为选择性增菌培养基,即除固有的营养成分外,再添加特殊抑制剂,有利于目的菌的生长繁殖,如碱性蛋白胨水用于霍乱弧菌的增菌培养。
3.选择培养基
在培养基中加入某种化学物质,使之抑制某些细菌生长,而有利于另一些细菌生长,从而将后者从混杂的标本中分离出来,这种培养基称为选择培养基(selective medium)。例如培养肠道致病菌的SS琼脂,其中的胆盐能抑制革兰阳性菌,枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌,因而使致病的沙门菌和志贺菌容易分离到。若在培养基中加入抗生素,也可起到选择作用。实际上有些选择培养基、增菌培养基之间的界限并不十分严格。
4.鉴别培养基
用于培养和区分不同细菌种类的培养基称为鉴别培养基(differential medium)。利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物不同,在培养基中加入特定的作用底物和指示剂,一般不加抑菌剂,观察细菌在其中生长后对底物的作用如何,从而鉴别细菌。如常用的糖发酵管、三糖铁培养基伊红-亚甲蓝琼脂等。也有一些培养基将选择和鉴别功能结合在一起,在选择的同时,起一定的鉴别作用,如SS琼脂,其中所加的底物乳糖和指示剂中性红就起到鉴别作用。
5.厌氧培养基
专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用的培养基,称为厌氧培养基(anaerobic medium)。这种培养基营养成分丰富,含有特殊生长因子,氧化还原电势低,并加入亚甲蓝作为氧化还原指示剂。其中心脑浸液和肝块、肉渣含有不饱和脂肪酸,能吸收培养基中的氧;硫乙醇酸盐和半胱氨酸是较强的还原剂;维生素K氯化血红素可以促进某些类杆菌的生长。常用的有庖肉培养基(cooked meat medium)硫乙醇酸盐肉汤等,并在液体培养基表面加入凡士林或液状石蜡以隔绝空气。
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